加入日期：2018.03.21 瀏覽次數(shù)：7664次
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| 凝膠成像系統(tǒng)的四項(xiàng)基本選購(gòu)原則 如果選購(gòu)一臺(tái)滿(mǎn)意適合的凝膠成像系統(tǒng)？很多號(hào)稱(chēng)“王牌”的設(shè)備是否真的能夠打滿(mǎn)分呢？下面的文章就向您介紹凝膠成像系統(tǒng)的“四項(xiàng)基本選購(gòu)原則”。有了這些原則，您在選擇成像儀時(shí)自然成竹在胸，無(wú)往不勝。那么，凝膠成像作為實(shí)驗(yàn)室里最為常用的儀器之一，成像設(shè)備成為常用的儀器。擁有一臺(tái)好的、運(yùn)行穩(wěn)定的設(shè)備是實(shí)驗(yàn)者的心愿。 凝膠成像系統(tǒng)選購(gòu)原則 原則一：“只選對(duì)的，不選貴的”市場(chǎng)上各品牌、各型號(hào)的成像儀林林種種，但是從成像原理上可以分成兩大類(lèi)，分別是拍照成像和掃描成像。拍照成像簡(jiǎn)單說(shuō)就是樣品和相機(jī)的相對(duì)位置不動(dòng)，可以進(jìn)行單次成像或多次成像；掃描成像則是相機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行局部成像，然后通過(guò)樣品或相機(jī)的移動(dòng)對(duì)整個(gè)樣品進(jìn)行成像。拍照成像目前主要采用CCD相機(jī)成像，由于可以設(shè)置不同的曝光時(shí)間，常被用來(lái)進(jìn)行微弱的化學(xué)發(fā)光及生物發(fā)光的成像。而掃描成像則由于精度高、重復(fù)性好被廣泛用于大型樣品以及多通道成像中。可以說(shuō)，對(duì)于大型樣品或多通道應(yīng)用，能選擇掃描成像的，盡量不要選擇拍照成像。原理搞清楚了，選擇起來(lái)就簡(jiǎn)單了。不同的原理導(dǎo)致了不同應(yīng)用的最佳選擇，所以千萬(wàn)不要相信什么“全能王”之類(lèi)的鬼話(huà)，沒(méi)有任何一款機(jī)器可以通吃所有應(yīng)用領(lǐng)域。 下面就實(shí)驗(yàn)室最常見(jiàn)的一些應(yīng)用簡(jiǎn)單的說(shuō)明選擇的依據(jù)：核酸電泳凝膠：一般此類(lèi)凝膠都采用EB染色、紫外激發(fā)，而且凝膠較小。推薦采用一般的凝膠成像系統(tǒng)即可完成。蛋白電泳凝膠：一般此類(lèi)凝膠采用考染或銀染，白光透射成像。對(duì)于小型凝膠您可以選擇一般的凝膠成像設(shè)備，但是對(duì)于大型凝膠，特別是雙向電泳凝膠，由于CCD拍照成像會(huì)有幾何扭曲，而且透鏡效應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致不同區(qū)域的信號(hào)強(qiáng)度差異，另外CCD拍照也無(wú)法保證不同凝膠的成像參數(shù)保持一致，因此掃描成像是最好選擇。轉(zhuǎn)印膜：這個(gè)稍微有些復(fù)雜。一般轉(zhuǎn)印膜有比色法顯色、同位素、化學(xué)發(fā)光和熒光等不同檢測(cè)手段。比色法顯色就是產(chǎn)生有顏色的條帶或斑點(diǎn)，一般采用普通的凝膠成像設(shè)備即可。同位素可以采用壓膠片曝光的方法，但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力而且容易過(guò)飽和。比較通用的方法是由FujiFilm在1981年發(fā)明的磷屏成像技術(shù)，獲得信號(hào)潛影的磷屏通過(guò)激光掃描就可以獲取同位素的信號(hào)。而化學(xué)發(fā)光是目前最常用的蛋白印跡的檢測(cè)手段，無(wú)疑，冷CCD拍照成像對(duì)這種微弱的光信號(hào)是最合適的。熒光是所有這些檢測(cè)手段中最令人贊嘆的和最有前景的。這不僅僅是因?yàn)闊晒馊玖暇哂凶顚挼膭?dòng)態(tài)范圍，而且還在于它能夠?yàn)槲覀兲峁┒嗤返臋z測(cè)途徑（同樣適用于凝膠）。當(dāng)然，您可以使用單一熒光檢測(cè)，這時(shí)您對(duì)凝膠成像設(shè)備的要求就包括了新的激光光源和相應(yīng)的濾光片。 如果您是一個(gè)完美主義者，或者您需要對(duì)鄰近或重疊的目標(biāo)分子進(jìn)行成像，那么多通道熒光檢測(cè)是您的不二之選。這時(shí)掃描成像絕對(duì)是最佳選擇，這樣選擇不僅僅是因?yàn)閽呙璩上衲軌驇?lái)更高的靈敏度和分辨率，更重要的是，不同通道之間沒(méi)有幾何扭曲，擬合性好。微孔板及其他特殊需求：對(duì)于拍照成像而言，由于幾何扭曲的問(wèn)題，對(duì)微孔板成像就變得比較復(fù)雜了，一般必須一個(gè)專(zhuān)用的校正裝置才可完成。當(dāng)然，如果采用掃描成像一般不需要任何額外附件。很多實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在都對(duì)小動(dòng)物成像非常感興趣，然而對(duì)小動(dòng)物進(jìn)行真的不是一件簡(jiǎn)單的事，一方面小動(dòng)物需要進(jìn)行麻醉和固定；另一方面還需要對(duì)信號(hào)位置進(jìn)行三維定位。因此，能同時(shí)提供功能、代謝和解剖圖像的PET/CT是進(jìn)行這類(lèi)成像的最有力的工具。 原則二：實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)好用才是硬道理。任憑你說(shuō)得天花亂墜，拿來(lái)我試試，不就什么都清楚了。現(xiàn)在多數(shù)廠商都提供Demo機(jī)服務(wù)，還有技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)答疑解惑，那就請(qǐng)各位上場(chǎng)，拼一下，誰(shuí)的性能好，價(jià)格優(yōu)，那我就要誰(shuí)的。當(dāng)然，我們的實(shí)際測(cè)試結(jié)果僅僅是針對(duì)我們自己的樣品和現(xiàn)場(chǎng)demo的機(jī)器而已。我們不能據(jù)此對(duì)相關(guān)品牌和相關(guān)型號(hào)做太多評(píng)判。由于具體應(yīng)用的限制、操作技巧的差異以及可能的儀器狀態(tài)的區(qū)別，我們有可能沒(méi)有給出公允的評(píng)價(jià)。但無(wú)論如何，這些訊息對(duì)我們采購(gòu)者和使用者來(lái)說(shuō)都是非常重要的。 原則三：“只比對(duì)的，不比費(fèi)的”我們崇尚實(shí)踐，然而，現(xiàn)實(shí)經(jīng)常不配合我們，或者是沒(méi)有Demo機(jī)，或者是有時(shí)我們還真的很難根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分辨出性能上的差異，這時(shí)候第三項(xiàng)原則將至關(guān)重要。當(dāng)我們?cè)诳疾靸x器Demo的情況后還是無(wú)法分辨其性能之優(yōu)劣時(shí)，除了可以了解其他人的使用情況和評(píng)價(jià)，就只能推開(kāi)儀器看參數(shù)了。當(dāng)然看參數(shù)是有竅門(mén)的。很多成像儀的參數(shù)寫(xiě)了幾十條，其實(shí)最關(guān)鍵的就那么幾條。我們對(duì)比不同廠商的參數(shù)時(shí)一定要注意只比關(guān)鍵的，而對(duì)那些無(wú)關(guān)痛癢的參數(shù)則大可以視而不見(jiàn)。另外，千萬(wàn)不要被廠商自己給相應(yīng)產(chǎn)品的評(píng)分所欺騙，他的那套評(píng)分系統(tǒng)僅僅是相對(duì)自己的產(chǎn)品而言，即使給出了最高分“5”分的優(yōu)秀指標(biāo)，和其他廠商產(chǎn)品的性能相比，可能還是屬于垃圾級(jí)的。對(duì)于掃描成像而言，靈敏度一般不是問(wèn)題，我們最關(guān)注的應(yīng)該是分辨率，當(dāng)然分辨率只要達(dá)到我們的要求即可，對(duì)于小型的凝膠、膜和微孔板來(lái)說(shuō)，一般分辨率在25um左右應(yīng)該是足夠了。在滿(mǎn)足分辨率后，一個(gè)更重要的參數(shù)擺在我們的面前，那就是動(dòng)態(tài)范圍，簡(jiǎn)單的說(shuō)，動(dòng)態(tài)范圍決定著你能否同時(shí)在一張膠上同時(shí)看到強(qiáng)的信號(hào)和弱的信號(hào)，而且他們之間保持比較好的定量關(guān)系。一般動(dòng)態(tài)范圍采用數(shù)量級(jí)來(lái)表示，這個(gè)數(shù)越大，表明動(dòng)態(tài)范圍越寬。對(duì)于激光掃描成像系統(tǒng)，情況就復(fù)雜一些。從激光器、濾光片到分光鏡和檢測(cè)器還有好多需要考慮和比較的。下面主要介紹實(shí)驗(yàn)室最常用的凝聚成像儀的參數(shù)選擇。根據(jù)原則一，如果您主要用它來(lái)拍普通核酸膠或蛋白膠，那么幾乎市場(chǎng)上所有的成像儀都可以很好的滿(mǎn)足您的需求，這時(shí)除了價(jià)格這個(gè)決定因素外，能比較的也就是一些諸如“操作是否簡(jiǎn)便、外形是否時(shí)尚”等無(wú)關(guān)痛癢的指標(biāo)了。真正需要花心思考察的可能就是準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶(hù)，他們對(duì)敏感度要求高，同時(shí)還要求比較寬的動(dòng)態(tài)范圍。要想捕獲到微弱的化學(xué)發(fā)光，需要上佳的CCD相機(jī)和鏡頭。一般來(lái)說(shuō)，CCD相機(jī)的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān)，溫度越低，噪音就越低。因此，-25℃的絕對(duì)制冷溫度是對(duì)相機(jī)的第一個(gè)要求（更低的溫度，噪音降低效果不明顯，而量子效率又會(huì)受很大影響）；另外，較大的像素能夠提供更高的捕光效率；所以對(duì)于相同大小的CCD芯片，需要注意像素的尺寸。鏡頭的參數(shù)就簡(jiǎn)單了，由于我們只需要觀察近距離的樣品而且一般可以調(diào)整樣品位置（有些廠家甚至提供電動(dòng)樣品升降平臺(tái)），所以基本無(wú)需選擇長(zhǎng)鏡頭或者變焦鏡頭；但是，由于我們需要檢測(cè)微弱的化學(xué)發(fā)光，鏡頭的光圈則至關(guān)重要，一般F值越小，其通光量越大，而且成平方反比關(guān)系，因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭。另外，如果鏡頭是電動(dòng)的，我們可以省卻打開(kāi)機(jī)箱，反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱。其他我們需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件。光源的種類(lèi)和發(fā)光的均一度，濾光片的數(shù)量和暗箱的遮光效果等均在我們的考慮范圍之內(nèi)。當(dāng)然，一般如果成像儀的CCD和鏡頭配置不錯(cuò)，一般這些部件也不會(huì)太差。 原則四“附加值很重要”很多用戶(hù)認(rèn)為，買(mǎi)來(lái)后擺在實(shí)驗(yàn)室使用的只是一臺(tái)儀器而已。其實(shí)，事實(shí)遠(yuǎn)不是這樣。買(mǎi)儀器來(lái)是為了使用，而能否用好，除了我們自己的聰明才智和勤學(xué)苦練之外，廠家的技術(shù)支持必不可少。因此，要買(mǎi)就買(mǎi)原廠貨已經(jīng)成為很多用戶(hù)的共識(shí)，因?yàn)檫@樣就可以享受到廠家現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)支持和指導(dǎo)。 | |
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